硝基咪唑酶联免疫检测试剂盒

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甲硝唑、二甲硝唑和洛硝哒唑是属于常用硝基咪唑类药物,用于预防和治疗特定病菌和原生动物疾病。由于硝基咪唑类化合物具有潜在的致癌性、诱导有机突变性,故欧盟和我国已禁止在任何动物源性食品中使用该类药物。目前测定硝基咪唑类的方法主要有气相色谱法和气相色谱质谱联用法、高效液相色谱法和高效液相色谱质谱联用法。但因这些检测方法投入成本高,检测时间长,方法复杂,现阶段不适宜在我国广泛推广使用。我公司研制出硝基咪唑类ELISA快速检测试剂盒,其方法简单,时间短,检测成本低,相比市面上的同类国产和进口产品,不仅价格低廉,质量还具有绝对优势,具有稳定性强,检测结果重复率高的特点。
中文名
硝基咪唑酶联免疫检测试剂盒
名词领域
药物测验
作    用
检测出蜂蜜中的硝基咪唑类药物
测验方法
竞争ELISA方法

硝基咪唑酶联免疫检测试剂盒检测原理

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本试剂盒是利用竞争ELISA方法,在酶标板微孔上预包被抗 硝基咪唑抗原。检测时,加入标准品或样品溶液,硝基咪唑抗体及酶标记物,包被抗原和加入样本中的硝基咪唑竞争性地与硝基咪唑抗体结合后,再与酶标记物形成抗原抗体复合物,用TMB底物显色;加入反应终止液,在450nm波长酶标仪下进行检测,样品中的硝基咪唑浓度与吸收光强度成反比。

硝基咪唑酶联免疫检测试剂盒检测范围

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本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较,能经济、快速地检测出蜂蜜中的硝基咪唑类药物。
三、交叉反应率
与类似物的交叉反应率:
甲硝唑(MNZ) 100%
洛硝唑(RNZ) 112%
异丙硝唑 33%
试剂盒灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度:0.05ppb
样本最低检测限:
蜂蜜 0.1ppb
回收率:
蜂蜜样本 90±10%
精密度:
试剂盒的变异系数均小于10%
图片仅供参考,产品以实物为准。
甲硝唑检测试剂盒说明书
硝基咪唑类酶联免疫检测试剂盒
使用说明书
一、检测原理
本试剂盒是利用竞争ELISA方法,在酶标板微孔上预包被抗 硝基咪唑抗原。检测时,加入标准品或样品溶液,硝基咪唑抗体及酶标记物,包被抗原和加入样本中的硝基咪唑竞争性地与硝基咪唑抗体结合后,再与酶标记物形成抗原抗体复合物,用TMB底物显色;加入反应终止液,在450nm波长酶标仪下进行检测,样品中的硝基咪唑浓度与吸收光强度成反比。
二、检测范围
本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较,能经济、快速地检测出蜂蜜中的硝基咪唑类药物。
三、交叉反应率
与类似物的交叉反应率:
甲硝唑(MNZ) ………………………………………100%
二甲硝咪唑DMZ…………………………………… 168%
洛硝唑(RNZ) ………………………………………112%
异丙硝唑……………………………………………33%
四、试剂盒组成
酶标板1块,96孔/板
标准液6瓶(1ml/瓶):
0 ppb、0.05ppb、0.2ppb、0.8ppb、3.2ppb、12.8ppb
抗体工作液 ………………………7ml
酶标记物 ……………………… 12ml
底物液A …………………………7ml
底物液B …………………………7ml
终止液 …………………………7ml
20X浓缩洗涤液 ………………40 ml
2X浓缩复溶液 ………………50 ml
说明书 ……………………………1份
五、 需要但试剂盒中不提供的器材和试剂
(1)设备
……微孔板酶标仪(450nm)
……振荡器、离心机
……微量移液器:20μl~200μl,100μl~1000μl
……容量瓶:100ml,500ml,1000ml
(2)试剂
……NaOH、无水碳酸钠、碳酸氢钠、正己烷
六、溶液的配制
样本前处理需配制:
配液1:pH7.2 0.1M 碳酸盐缓冲液
称取4.66g无水碳酸钠,0.5g碳酸氢钠
去离子水500ml溶解。
配液2:2M 氢氧化钠溶液
称取40g氢氧化钠,加入去离子水500ml溶解。
配液3:复溶液1×
2×复溶液在使用前请按1:1稀释
(1份浓缩复溶液+1份去离子水)
配液4:洗涤液
将40ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用蒸馏水稀释
(1份浓缩洗涤液+1份去离子水)
(可按需配置)
七、样本前处理方法
样本处理前须知
处理任何样本时,都须注意:
(1)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。
(2)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必须使用洁净实验器具,以避免污染干扰实验结果。
样本处理步骤:
(A)蜂蜜(样本稀释倍数0.5)
(1)取3g蜂蜜,加3ml 0.1M 碳酸盐缓冲溶液振荡至蜂蜜全部溶解;
(2)加入9ml 乙酸乙酯,振荡5分钟,室温4000转/分,离心5分钟;
(3)取上层有机相6ml至另一离心管中,加入2ml乙酸乙酯,2ml 2M氢氧化钠溶液,振荡5分钟,室温4000转/分,离心5分钟;
(4)取4ml清澈上层有机相至干净玻璃试管中,56℃水浴氮气/空气吹干;
(5)加入正己烷1ml,涡动30s,再加入0.5ml复溶工作液混合30秒,室温4000转/分以上,离心5分钟;
(6)去除上层有机相,取下层50µl液体用于分析。
八、酶联免疫检测步骤 测定前须知:
1、使用之前将所有试剂和需用微孔板回升至室温。
2、使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
3、在使用中不要让微孔干燥。
4、在ELISA分析中的重复性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
5、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用该板膜盖住微孔板。
测定步骤:
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,抗体不用在室温下平衡,每种液体使用前均须摇匀。注意标准液均需做2个平行试验。
2、加标准品/样本50µl /孔,再加入抗体工作液50µl/孔。轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板,4℃环境反应1小时。
3、小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,加洗涤液 250ml/孔,每次浸泡15~30秒,充分洗涤4-5次,用吸水纸拍干。
4、加酶标记物每孔100μl,用盖板膜盖好,25℃下避光反应30分钟。取出酶标板,重复步骤3;
5、每孔先各加入底物液A 50μl,再各加入底物液B 50μl,轻
轻晃荡混匀,并在25℃下避光反应30分钟。
6、每孔各加50μl终止液,在酶标仪于450nm处测定OD值(建议用450/630nm双波长检测,在5分钟内读完数据)。
九、结果分析
所测得的标准液或样品吸光度的平均值(B)除以第一个标准液(0标准液)的吸光度(B0)值再乘以100%,得到百分吸光度值。
百分吸光度值(%)=B/B0 ×100%
以标准品浓度的10为底的对数为X轴, 百分吸光值为Y轴,绘制标准曲线。将样本的百分吸光值代入标准曲线,从标准曲线上读出样本所对应的值,作为10的幂,乘以稀释倍数,即为样品中所含硝基咪唑类药物的量。
利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样品的准确、快速分析。
十、试剂盒灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度:0.05ppb
样本最低检测限:
蜂蜜样本…………………………………………0.1ppb
粤尔LOGO 粤尔LOGO
回收率:
蜂蜜样本 …………………………………………90±10%
精密度:
试剂盒的变异系数均小于10%
十一、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20-25℃)
会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准
曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应
立即进行下一步操作。
3、反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。如不慎滴漏到皮肤上,请尽快用水冲洗。
4、不要使用过了有效日期的试剂盒;也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
5、保存试剂盒于2-8℃,不要冷冻,将不用的微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
6、显色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450nm)值小于0.5(A450nm<0.5 )时,表示试剂可能变质。
7、在加入底物液后,一般显色15分钟即可。若颜色较浅,可延长反应时间到20分钟(或更长),但不得超过30分钟。反之,则减短反应时间。
十二、贮藏条件及保存期
贮藏条件:在2~8℃保存试剂盒
保存期:本试剂盒有效期为12个月。
参考资料